ICS07.100.30 CCSC53T/ZACA 团 体 标 准 T/ZACA031—2020 食源性致病菌快速检测 微流控芯片法 Rapiddetectionofpathogensinfood— Microfluidicchipmethod 2020-10-14发布 2020-10-16实施 浙江省质量合格评定协会 发布 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 T/ZACA031—2020 I目  次 前言.....................................................................................................................................................................II 1范围.................................................................................................................................................................1 2规范性引用文件.............................................................................................................................................1 3术语和定义.....................................................................................................................................................1 4原理.................................................................................................................................................................2 5仪器与设备.....................................................................................................................................................2 6试剂与材料.....................................................................................................................................................2 7检测程序.........................................................................................................................................................4 8操作步骤.........................................................................................................................................................4 9质量控制.........................................................................................................................................................6 10结果表述.......................................................................................................................................................6 11生物安全措施...............................................................................................................................................6 附录A（规范性附录）微流控芯片试剂组分和存放条件...........................................................................7 附录B（规范性附录）培养基及试剂............................................................................................................9 附录C（规范性附录）微流控芯片制作与质量控制.................................................................................10 全国团体标准信息平台 T/ZACA031—2020 II前  言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起 草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本文件由浙江省质量合格评定协会提出并归口。 本文件主要起草单位：绿城农科检测技术有限公司、宁波爱基因科技有限公司、浙江省农业科学院。 本文件主要起草人：王珍、卢先东、肖英平、刘艳红、牟文秀、陆雯、吴岳琴、周婷婷、汪腊云、 刘萌、乙丛敏、张彩燕、孙莹巧、陈涛、俞琦娅、李秀通、彭醒醒。 本标准为首次发布。 全国团体标准信息平台 T/ZACA031—2020 1食源性致病菌快速检测微流控芯片法 1范围 本文件规定了食品中金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、沙门氏菌(Salmonella)、单核细 胞增生李斯特氏菌(Listeriamonocytogenes)、大肠埃希氏菌O157:H7(EscherichiacoliO157:H7)、 副溶血性弧菌(Vibrioparahaemolyticus)、志贺氏菌(Shigella)、阪崎肠杆菌(Cronobacter)和蜡样芽 胞杆菌(Bacilluscereus)的快速检测方法（微流控芯片法）。 本文件适用于食品中上述8种食源性致病菌的快速检测。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB4789.1食品安全国家标准食品微生物学检验总则 GB4789.4食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验 GB4789.5食品安全国家标准食品微生物学检验志贺氏菌检验 GB4789.7食品安全国家标准食品微生物学检验副溶血性弧菌检验 GB4789.10食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验 GB4789.14食品安全国家标准食品微生物学检验蜡样芽胞杆菌检验 GB4789.30食品安全国家标准食品微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌检验 GB4789.36食品安全国家标准食品微生物学检验大肠埃希氏菌O157:H7/NM检验 GB4789.40食品安全国家标准食品微生物学检验克罗诺杆菌属（阪崎肠杆菌）检验 GB19489实验室生物安全通用要求 GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测 GB/T19495.2转基因产品检测实验室技术要求 3术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3.1微流控芯片microfluidicchip 利用微加工技术，在硅、石英玻璃或高分子材料等基质上加工出各种结构，如管道、反应池、微泵、 微阀等功能单元，包含1-32个靶点，检测体积5µL，30分钟完成检测，可避免气溶胶产生，是一种用 于样品检测的微系统。 4原理 全国团体标准信息平台 T/ZACA031—2020 2食源性致病菌待测样本经增菌（菌悬液无需增菌）提取核酸，注入预先包埋特异性基因片段引物并 带有实时荧光检测的微流控芯片中，进行恒温扩增，通过微流控芯片检测仪实时捕获SYBRGreen荧光信 号，扩增产物随荧光信号出现的时间、强度和位置，判断样本中是否含有目标菌。 5仪器与设备 ——冰箱：2℃~5℃、-20℃±5℃； ——培养箱：36℃±1℃，30℃±1℃； ——均质器； ——漩涡振荡仪； ——电子天平：感量0.1g； ——高速离心机：12000g/min； ——干式恒温仪：100℃±1℃； ——生物安全柜； ——微