ICS65.020.20 CCSB16 团 体 标 准 T/SDAS241—2021T/SDAS 设施黄瓜根结线虫调查检测规程 Technicalspecificationforinvestigationanddetectionofroot-knotnematodesin greenhousecucumberproduction 2021-07-13发布 2021-07-13实施 山东标准化协会发布 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 T/SDAS241－2021 I前言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由山东省农业科学院农作物种质资源研究所提出。 本文件由山东标准化协会归口。 本文件起草单位：山东省农业科学院农作物种质资源研究所、浙江省农业科学院、山东省农业科学 院农业质量标准与检测技术研究所。 本文件主要起草人：谷晓红、蒲艳艳、王文博、姚川、吴长兴、陈丽萍、徐明飞、孙玉霞、苑学霞。 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 T/SDAS241－2021 1设施黄瓜根结线虫调查检测规程 1范围 本文件规定了设施黄瓜生产环节根结线虫发生和为害的调查、取样、检测方法。 本文件适用于对设施黄瓜生产环节植物、土壤和栽培介质中根结线虫的调查与检测。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 NY/T1485香蕉穿孔线虫检疫检验与鉴定技术规范 3术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4仪器、试剂和用具 4.1调查采样用具 取样器、铲、枝剪、聚乙烯自封袋、标签、油性笔、记录表。 4.2仪器 直径10 cm～14 cm漏斗、乳胶管、止水夹、漏斗架、浅筛盘、40～500目标准套筛、试管、培养皿、 玻璃吸管、线虫挑针、脱脂纱布、凹玻片、载玻片、盖玻片。 4.3设备 解剖镜、数字智能显微镜、恒温水浴锅、控温电热平板、大容量离心机、普通冰箱、低温冰箱。 4.4试剂和材料 4.4.1试剂 40 %甲醛、90 %乙醇、苯酚、甘油、硫酸镁、次氯酸钠溶液、二氧化氯消毒片、纯水。 4.4.2材料 谷物单筒取样器、土壤铲、土壤刻度取样器、聚乙烯自封袋、隔离鞋套、塑料袋、湿巾。 5现场调查和取样 5.1进出生产区的卫生要求 全国团体标准信息平台 T/SDAS241－2021 2调查取样前应准备取样工具、样本容器、隔离鞋套、用后物品收集容器、调查记录工具等，其中， 每进入一个封闭生产区域作业应更换取样工具和隔离鞋套，用后物品收集后带出生产区。 5.2调查 可使用问询了解、生产观察、测量拍照等方式了解土壤消杀方式，投入物料和种苗品种、使用杀虫 剂或微生物菌剂种类，物料和种苗来源、根结线虫为害症状等，采集的样品放入自封袋后，贴上标签， 核对抽样计划编号，填写《植物有害生物调查抽样记录表》（附录A）。 5.3取样 5.3.1回填的粪肥和介质 对拟回填的粪肥、秸秆、稻壳等物料，以单筒取样器取样，同批次物料，每堆依环状从各方向选取 3～5点抽取，取样器中物料直接放入自封袋中混匀，以四分法保留1 000 g～2 000 g作为1个样品。取样 后，仔细清理取样铲上的物料，以消毒湿巾擦拭干净后备用。 5.3.2移栽定植前土壤 土壤消杀揭膜后5 d～7 d，在一个温室（大棚）内可采用S形或梅花形布点采样，确定9～15个取样 点，铲去表层土壤，以土壤取样器分别抽取5 cm～30 cm和30 cm～50 cm土层样品，将2个土层取样点土壤 分别混合均匀后，以四分法保留1 000 g～2 000 g土壤作为土样，放入聚乙烯样品袋。 5.3.3地栽植物及根际土壤 如植物有为害症状，选取症状明显的植株取样。如植物无明显症状表现时，可采用对角线、棋盘式 或平行跳跃式取样方法，在一个温室内不同区域共确定6～15个植株取样。取样时，用枝剪剪断待取样 本植株，小心揭开地膜，铲去表层土壤和杂物，取营养根及根际土壤约500 g，分别放入自封袋中，剩 余土壤回填至取样点，重新覆盖好地膜。不同生产区域使用不同的土壤铲，用过的土壤铲放入自封袋后 带回清洁后备用。 5.3.4成品苗及基质 自产或采购的待移植苗，对箱装成品苗按棋盘式或五点式随机取样，同时兼顾上、中、下层的代表 性。每批成品苗按总件数的3 %的比例取样，每穴盘中抽取3棵带基质苗，整体装入自封袋中。 5.4样品保存 采集的样品应及时送回实验室处理；若不能及时分离，可将样品放在20 ℃～25 ℃、相对湿度40 %～ 50 %的室内样品柜，打开袋口，避免阳光照射，样品保存不超过7 d。 6检测 6.1样品中线虫的分离 根据样品类型和实验室条件，按照NY/T1485提供的一种或几种方式分离样品中的线虫。 6.2线虫鉴定标本的制作 按NY/T1485提供的方法制作，备做形态鉴定。如需进一步开展根结线虫种或小种的鉴定，将分离 的样本移入离心管中，以-80 ℃低温冰箱保存，待作DNA分子鉴定。 全国团体标准信息平台 T/SDAS241－2021 36.3黄瓜根系检查 将黄瓜根系土壤仔细清除，在容器中清洗干净，置于白磁盘中观察，符合附录B的，按6.4开展线虫 形态检查。 6.4线虫形态检查 在显微镜下对分离的线虫和线虫标本的形态特征进行观察、测量和记述，主要根结线虫种类和形态 特征见附录B。 6.5废弃物的处置 检测剩余的土壤、介质和黄瓜根，应放回自封袋中，每个废弃物袋内放入二氧化氯消毒片1片或少 许次氯酸钠溶液，密闭放置7 d后再行处理。 7结果确定 依据雌、雄成虫、2龄幼虫的综合形态特征进行鉴别判定，其寄主、来源、为害症状及传播途径等 可作为辅助的依据，符合形态特征的，可确定为根结线虫。 8结果反馈 就是否检出线虫、线虫数量、样本名称、样本来源等调查检测信息，反馈给产地经营人员。 全国团体标准信息平台 T/SDAS241－2021 4AA 附录A （资料性） 根结线虫调查取样记录表 根结线虫调查取样记录表见表A.1。 表A.1根结线虫调查取样记录表 编号： 生产/经营者 地址 日期 联系电话 样品编号 样本名称 品种名称 植物生育期调查代表株数和 面积样本来源 地上部症状描述： 地下部症状描述： 防控措施： 抽样方法、部位和抽样比例： 备注： 全国团体标准信息平台 T/SDAS241－2021 5BB 附录B （资料性） 黄瓜根结线虫病的形态特征与危害症状 B.1黄瓜根结线虫病症地上部症状 轻病症地上部症状不明显；病症重时，地上部生长缓慢，植株矮小，叶片发黄，或发育不良，似缺 水缺肥状。气温高时，植株呈萎蔫状，早晚气温低时，萎蔫的植株可恢复正常。生产株结瓜小而少，造 成减产。 B.2黄瓜根结线虫病症地下部症状 根结线虫为害侧根和须根较为严重，受害根部形成许多大小不同、形态各异的根结，根结色为黄色 至褐色，呈串珠状，整个根系变粗；病害加重时，根系逐渐腐烂。 全国团体标准信息平台 T/SDAS241－2021 6附录C （资料性） 黄瓜根结线虫的主要病原线虫和形态特征 C.1主要病原线虫 南方根结线虫Meloidogyne.incognita、花生根结线虫Meloidogyne.arenaria、北方根结线虫 Meloidogyne.hapla、爪哇根结线虫Meloidogyne.javanica，形态特征见NY/T2049—2011中B.1～B.4。 C.2主要病原线虫的测量值范围 雌成虫埋生在寄主根内，呈梨形，虫体透明，平均体长为440 μm～1 300 μm，平均体宽为325 μm～ 700 μm，虫体前体部突出如颈，后体部呈圆球形。唇区略呈帽状，口针长12 μm～15 μm，无尾部。阴 门和肛门在圆球形体后部，肛阴周围的角质膜形成特殊的会阴花纹。雄成虫呈细长蠕虫形，长700 μm～ 1 900μm，宽30 μm～36 μm，头部略尖呈圆锥形，尾短钝圆、后体部常向腹面扭曲。垫刃型食道，有 明显口针。二龄幼虫呈蠕虫形，平均体长400 μm～500 μm，尾部长圆锥型，食道腺发育良好。卵呈肾 形或长椭圆形，白色至淡褐色，约83 μm×38 μm。卵囊为黄褐色，是雌成虫产卵时直肠腺分泌物将产 出的卵粘在一起集结形成胶质的卵块，内含300～500粒卵。 全国团体标准信息平台