ICS65.020.30 B43 团体标准 T/SDAA025－2021 饲料中主要病原微生物快速检测方 法-微生物快速检测系统(MBS) Rapiddetectionmethodofmainpathogenicmicroorganismsin feed-MicroBiologySurvey（MBS） 2021－06－22发布 2021－07－23实施 山东省畜牧协会发布 全国团体标准信息平台 2T/SDAA025-2021 全国团体标准信息平台 3T/SDAA025-2021 前言 本标准按照GB/T1.1-2020给出的规则起草。 本标准由山东省畜牧协会提出并归口。 本文件起草单位：青岛农业大学、山东农业大学、山东省农业科学院家禽研究所、山东畜牧 兽医职业学院、山东省畜牧产品质量安全中心、临沂大学、新希望六和股份有限公司、Royal Biotech。 本文件主要起草人：朱风华、朱连勤、陈甫、尹燕博、刘水涛、宋志刚、宋敏训、王述柏、 孙京新、李舫、孟凡生、冯鑫磊、郭吉原，宋新磊、徐妍。 本文件为首次发布。 全国团体标准信息平台 4T/SDAA025-2021 全国团体标准信息平台 5T/SDAA025-2021 饲料中主要病原微生物快速检测方法 -微生物快速检测系统（MBS） 1.饲料中主要病原微生物快速检测方法-微生物快速检测系统（MBS） 1.1中文名称 饲料中主要病原微生物快速检测方法-微生物快速检测系统 1.2英文名称 Rapiddetectionmethodofmainpathogenicmicroorganismsinfeed-MicroBiologySurvey （MBS） 2.范围 本标准规定了饲料中细菌总数、沙门氏菌、大肠菌群、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、 单核增生李斯特菌微生物快速检测系统（MBS）检测方法。 本标准适用于配合饲料（蛋鸡配合饲料、肉鸡配合饲料、猪配合饲料、肉鸭配合饲料）、 动物源性饲料（血粉、肉骨粉、鱼粉、羽毛粉、乳清粉）、植物源性饲料（玉米、麸皮、豆 粕、花生粕、棉籽粕）中细菌总数、沙门氏菌、大肠菌群、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、 单核增生李斯特菌含量的快速检测。 3.规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期 的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括 所有的修改单）适用于本文件。 GB19489实验室生物安全通用要求 4原理 MBS方法通过氧化还原指示剂测量微生物主要代谢途径中氧化还原酶的催化活动。氧 化还原指示剂会根据介质的氧化状态改变指示剂颜色。颜色变化耗时与微生物污染程度的 Log值呈负相关关系，从而可获得观察到的酶活性与检测样本中活细胞的数量之间存在的确 定相关性。 微生物快速检测试剂瓶内的营养物，维持目标细菌的生长；选择性药剂，抑制非目标细菌的 生长；而其中的还原剂，作为递氢体，能在细胞色素C后把电子转移到细菌呼吸链，而又 全国团体标准信息平台 6T/SDAA025-2021 不被氧分子氧化。如果目标细菌存在，那么检测瓶中的氧化还原反应色素会根据媒质的 氧化还原状态改变颜色。MBS主机通过三光波探测颜色变化，最后根据整合颜色变化 的时间确定细菌的含量。 5试剂和材料 除另有规定外，试剂为分析纯或生化试剂。 5.120%无菌甘油：水：甘油=5:1。 5.2微生物快速检测试剂瓶。 6仪器和设备 6.1微生物快速检测系统（MBS）：MBS-MR主机、笔记本电脑、MBS中文操作软件和微 生物快速检测试剂瓶。 6.2冰箱：2-5℃或-20℃。 6.3涡旋振荡器。 6.4电子分析天平：感量0.01g。 7检验 7.1饲料中细菌总数的检验 7.1.1将MBS-MR主机、笔记本电脑接通电源，并用数据线将两者连接，在电脑上启动 MBS中文操作软件，点击“参数”录入相关信息（包括：操作员姓名、操作员职务、检测样 本所属客户等信息）；在软件操作界面的样品设置选项中对样品进行基本信息设置，在分析 设置选项中设置细菌总数，并选择定量分析。 7.1.2将配套20%无菌甘油加入到细菌总数试剂瓶中，溶解试剂。 7.1.3带好无菌手套，用消毒后的药匙或无菌镊子取待测饲料样品，并准确称取1g（精确 到0.01g），加入到细菌总数试剂瓶中。 7.1.4摇动试剂瓶（手摇1-2分钟或涡旋振荡器振荡20-30秒），直到饲料样品溶解完全或 与试剂充分混合。 7.1.5设置相应的参数后，将处理好的试剂瓶放入MBS-MR主机中，进行孵育，MBS-MR 主机会自动控温，然后开始进行分析。 7.1.6分析完成后，按下试剂瓶顶部，瓶盖内部的消毒灭菌物质会释放至试剂瓶内，5-10 分钟即可充分灭菌，将灭菌后的试剂瓶丢弃到生物垃圾箱中集中处理。 7.1.7检测结束后，系统可以输出检验报告，报告的内容包括用户设定的全部信息、检测结 果，如变色时间、样本中微生物的浓度和检测中的所有参数。 7.2饲料中沙门氏菌的检验 全国团体标准信息平台 7T/SDAA025-2021 7.2.1在7.1.1中的分析设置选项中设置沙门氏菌，并选择定量分析，其他步骤同7.1.1—7.1.7。 7.3饲料中大肠菌群的检验 7.3.1在7.1.1中的分析设置选项中设置大肠菌群，并选择定量分析，其他步骤同7.1.1—7.1.7。 7.4饲料中金黄色葡萄球菌的检验 7.4.1在7.1.1中的分析设置选项中设置金黄色葡萄球菌，并选择定量分析，其他步骤同 7.1.1—7.1.7。 7.5饲料中大肠埃希菌的检验 7.5.1在7.1.1中的分析设置选项中设置大肠埃希菌，并选择定量分析，其他步骤同 7.1.1—7.1.7。 7.6饲料中单核增生李斯特菌的检验 7.6.1在7.1.1中的分析设置选项中设置单核增生李斯特菌，并选择定量分析，其他步骤同 7.1.1—7.1.7。 8结果记录 微生物快速检测系统（MBS）自动给出定量分析检测报告，读取数据，记录结果。 9质量控制 本方法在1-108cfu/ml（g）添加浓度水平上的回收率为87.19%-97.66%(n≥10)，变异系数 为7.18%-10.28%（n≥10）。 全国团体标准信息平台 8附录A微生物快速检测（MBS）孵育温度/检测时间快查表 噬温 菌总 数 22℃菌落 总数大肠 菌群大肠 杆菌大肠 埃希 氏菌金 黄 色 葡 萄 球 菌铜绿 假单 胞菌沙 门 氏 菌李 斯 特 菌肠 球 菌产气 荚膜 梭菌乳 酸 杆 菌真菌 (曲 霉 菌)酵母 菌 酵母 属 检测瓶代 号CBT- A01CBT-A 01CO-A 02CO-A 02EB-A 03SP-A 04PAO-A 05SL-A 06LY-A 07EF-A 09CP-A 17LB-AAS-A 10SC-A 11 20℃下保 质期 (月)12 12 6 6 4 6 6 6 6 3 3 3 3 3 5℃下保 质期 (月)24 24 12 12 8 12 12 12 12 6 6 6 6 6 孵育 温度 (℃)22 30 37 44 37 37 37 37 37 37 44 37 30 30 阴性色 BLUE BLUE RED RED RED RED BLUE RED BLUEYELL OWYELL OWRED BLUE BLUE 阳性色YELL OWYELL OWYELL OWYELL OWYELL OWYELL OWYELLO WYELL OWYELL OWBLAC KBLAC KYELL OWYELL OWYELL OW 样 本 中 的 细 菌 浓 度CFU /ml or CFU /g变色时间（小时） 1×107＜ 7.30<3.00＜ 4.00＜ 2.30＜ 4.30＜ 7.30＜ 4.30＜ 4.00＜ 7.30＜ 4.30＜ 7.30 19＜ 6.00＜ 6.00 1×1067.3 3.00 4 2.3 4.3 7.3 4.3＜ 4.007.3 4.3 7.329.3 6 6 1×10512 5.30 6.3 5.3 7.3 11 7.3 4.3 12 7.3 12 40 13 13 1×10416.3 8.00 9.3 9.3 10 20 10 8.3 16 10 16.3 51 20.320.3 1×10320.311.0012.3 13 13 29.3 1313.320.3 13 20.3 61 27.327.3 102 25 14.00 16 18 16 36 16 18 25 16 25 72 35 35 10 29.316.00 19 22 19 43 19 23 29 19 29 83 42 42 1 33.318.00 22 26 22 46 22 28 33.3 22 33 94 50 50 0＞ 34.00＞ 20.00＞ 24.00＞ 30.00＞ 24.00＞ 48.00＞ 24.0 0＞ 32.00＞ 36.0 0＞ 24.00＞ 36.00＞ 96.00＞ 60.00＞ 60.00 全国团体标准信息平台 9全国团体标准信息平台