ICS 71.100.70 Y 42 T/SDAQI 团体标准 T/SDAQI 004—2021 化妆品中牛磺酸的测定 高效液相色谱法 Determination of taurine in cosmetics-High performance liquid chromatography 2021 - 09 - 25 发布 2021 - 10 - 25 实施 山东质量检验协会 发布 全国团体标准信息平台 T/SDAQI 004—2021 版权说明 本文件系由山东质量检验协会（简称“协会”）组织创制的团体标准文本（含制定 过程中的草案）， 协会拥有本文件的著作权，受《中华人民共和国著作权法》保护。除法律所允许的情形或事先得到协会 书面许可外，任何组织和个人不得以任何理由进行复制、销售、传播本文件，或抄袭、歪曲本文件等侵 权行为，否则，行为人应承担相应的民事、行政责任，构成犯罪的，将依法追究其刑事责任。其他文件 引用本文件，不属侵权行为。 凡利用本文件进行或支持贸易、认证等商业活动，应事先购买正式文本或得到协会书面授权。购买 本文件或获得授权，请与协会联系。 欢迎社会各界举报侵权盗版行为，协会将依法严格保护举报人信息。 联系人：范红梅 联系电话： 0531-89701986 15668365153 联系邮箱： [email protected] 协会对本版权声明拥有最终解释权。 I 全国团体标准信息平台 T/SDAQI 004— 2021 前言 本文件按照GB/T 1.1—2020 《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由山东质量检验协会提出并归口。 本文件起草单位： 山东省产品质量检验研究院、滨州市食品药品检验检测中心、山东福瑞达生物工 程有限公司 。 本文件主要起草人： 侯广月、杜营、王梅、王亭亭、周莉莉、张鑫、卞英芳、刘宁、孔寒、刘金霞、 高伟、张永菊、牛欣宁、康兆广、丁卫平、刘晓鹏、陈玉荣。 本文件的所有权和解释权归山东质量检验协会。 如果您在本文件使用中发现错误或技术内容有不当之处，请及时与协会秘书处联系，将意见发送到 [email protected]。 II 全国团体标准信息平台 T/SDAQI 004—2021 化妆品中牛磺酸的测定 高效液相色谱法 1 范围 本文件规定了化妆品中牛磺酸的高效液相色谱测定方法。 本文件适用于液体类、乳类和膏霜类化妆品中牛磺酸的测定。 本文件的方法检出限为50 mg/kg ，定量限为 150 mg/kg。 2 规范性引用 文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 原理 用乙腈水溶液提取试样中的牛磺酸， 取上清液用丹磺酰氯衍生反应， 衍生物经 C18反相色谱柱分离， 用配有紫外或二极管阵列检测器的高效液相色谱仪测定，以色谱峰的保留时间定性，外标法定量。 5 试剂 除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。 乙腈：色谱纯。 5.1 乙酸铵：色谱纯。 5.2 正己烷：色谱纯。 5.3 盐酸。 5.4 无水碳酸钠。 5.5 盐酸甲胺（甲胺盐酸盐） 。 5.6 1 全国团体标准信息平台 T/SDAQI 004 —2021 丹磺酰氯（ 5-二甲氨基萘- 1-磺酰氯） ：色谱纯。 5.7 注：丹磺酰氯对光和湿敏感不稳定，在干燥器中避光保存。 牛磺酸（CAS 号：107-35-7） ，纯度不低于 99.0 %。 5.8 盐酸溶液（ 1 mol/L）： 吸 取 9 mL盐酸（5.4） ，用水稀释定容到 100 mL。 5.9 碳酸钠缓冲溶液（pH 9.5 ）（80 mmol/L） ：称取 0.424 g无水碳酸钠（ 5.5）。 加 入40 mL水溶解， 5.10 用1 mol/L盐酸溶液（ 5.9）调pH至9.5，用水定容至 50 mL。该溶液在室温下 3个月内稳定。 丹磺酰氯溶液（ 1.5 mg/mL）： 称 取 0.15 g丹磺酰氯（ 5.7）， 用 乙 腈 （ 5.1）溶解并定容至 100 mL。 5.11 临使用前现配。 盐酸甲胺溶液（ 20 mg/L） ：称取 2.0 g盐酸甲胺（5.6 ） ，用水溶解并定容至 100 mL。该溶液保 5.12 存在4 ℃下3个月内稳定。 乙腈水溶液（10 % ，体积比） ：量取 100 mL乙腈（5.1 ）， 加 水900 mL，充分混匀。 5.13 乙腈水饱和 正己烷：取 200 mL正己烷（5.3 ）于250 mL分液漏斗中，加入适量 10 %乙腈水溶液 5.14 （5.13） ，剧烈振荡，静置分层后，弃去下层乙腈 -水层即得。 乙酸铵溶液（20 mmol/L）： 称 取 1.54 g乙酸铵（ 5.2） ，加入适量水溶解，用水定容至 1000 mL， 5.15 经0.22 μm水相微孔滤膜过滤后备用。 牛磺酸标准储备溶液（1.0 mg/mL） ：准确称取适量牛磺酸标准品（精确至 0.1 mg） ，用水溶解配 5.16 制成浓度为 1.0 mg/mL 的标准储备液。 2 ℃~8 ℃保存，有效期 7天。 牛磺酸标准工作溶液：将牛磺酸标准储备液（5.16 ）用水依次稀释成 0 μg/mL 、1.0 μg/mL 、 5.17 2.0 μg/mL、5.0 μg/mL、10.0 μg/mL、20.0 μg/mL 、50.0 μg/mL、 100.0 μ g/mL的系列标准溶液。 使用前配制。 6 仪器和设备 高效液相色谱仪：配有二极管阵列检测器或紫外检测器。 6.1 分析天平：感量分别为 0.1 mg 和 0.01 g 。 6.2 超声波清洗器。 6.3 涡旋混合器。 6.4 离心机：转速不低于 6000 r/min 。 6.5 pH计：精度 0.01。 6.6 2 全国团体标准信息平台 T/SDAQI 004—2021 分液漏斗： 250 mL。 6.7 微孔滤膜： 0.45 μm 。 6.8 7 试验步骤 试液制备 7.1 7.1.1 试液提取 7.1.1.1 液体类化妆品 称取试样0.5 g（精确至 0.1 mg） ，置于锥形瓶中，加入约 20 mL乙腈水溶液（ 5.13） ，充分混合，超 声提取25 min ，冷却至室温，转入 25 mL容量瓶中，用乙腈水溶液（5.13）定容至刻度，充分混匀。样 液于6000 r/min 下离心5 min，取上清液备用。上清液在4 ℃暗处保存放置 24 h内稳定。 7.1.1.2 乳类、膏霜类化妆品 称取试样0.5 g（精确至 0.1 mg） ，置于锥形瓶中，加入约 20 mL乙腈水溶液（ 5.13） ，充分混合，超 声提取25 min ，冷却至室温，转入 25 mL容量瓶中，用乙腈水溶液（5.13）定容至刻度，充分混匀。样 液于6000 r/min下离心5 min，取上清液备用。上清液在4 ℃暗处保存放置24 h 内稳定。若离心后上清 液仍浑浊的样品，以 7.1.1.3进行试样提取。 7.1.1.3 部分膏霜类化妆品 称取试样0.5 g（精确至 0.1 mg） ，置于锥形瓶中，加入约 20 mL乙腈水溶液（ 5.13） ，充分混合，超 声提取25 min。冷却至室温，加入 10 mL乙腈水饱和的正己烷（ 5.14） ，充分混合后静置，用吸管将上层 正己烷絮凝状物质仔细吸净弃去。 在下层溶液中再加入10 mL 乙腈水饱和的正己烷（ 5.14） ，充分混合后 静置，弃去上层正己烷。转入25 mL容量瓶中，用乙腈水溶液（5.13）定容至刻度，充分混匀。样液于 6000 r/min 下离心5 min，取上清液备用。上清液在 4 ℃暗处保存放置 24 h内稳定。 7.1.2 试液衍生化 准确吸取1.00 mL 7.1.1所得上清液到 10 mL具塞玻璃试管中，加入 1.00 mL碳酸钠缓冲溶液（ 5.10）， 1.00 mL丹磺酰氯溶液（ 5.11） ，充分混合，室温避光衍生反应2 h （1 h后需摇晃1次） ，加入 0.10 mL盐 酸甲胺溶液（5.12）涡旋混合，以终止反应，避光静置至沉淀完全。取上清液经有机相微孔滤膜过滤后上机测定。衍生液在 4 ℃以下可避光保存 48 h。 另取1.00 mL标准工作液（5.17） ，与试液同步进行衍生。 仪器参考条件 7.2 7.2.1 色谱柱：C 18反相色谱柱， 250 mm×4.6 mm(i,d) ，5 μm，或性能相当者。 7.2.2 流动相：乙腈： 20 mmol/L 乙酸铵溶液 =30:70（体积比） 。 3 全国团体标准信息平台 T/SDAQI 004—2021 7.2.3 流速