ICS 67.050 CCS X 10/29 T/SDAQI 团体标准 T/SDAQI 010—2021 牛奶中致敏原 （α-乳白蛋白和β- 乳球蛋白）快速检测 The rapid detection of allergens ( α-lactalbumin and β-lactoglobulin) in milk electrochemical sensor method 2021 - 09 - 25 发布 2021 - 10 - 25 实施 山东质量检验协会 发布 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 T/SDAQI 010— 2021 版权声明 本文件系由山东质量检验协会（简称“协会”）组织创制的团体标准文本（含制定 过程中的草案）， 协会拥有本文件的著作权，受《中华人民共和国著作权法》保护。除法律所允许的情形或事先得到协会 书面许可外，任何组织和个人不得以任何理由进行复制、销售、传播本文件，或抄袭、歪曲本文件等侵 权行为，否则，行为人应承担相应的民事、行政责任，构成犯罪的，将依法追究其刑事责任。其他文件 引用本文件，不属侵权行为。 凡利用本文件进行或支持贸易、认证等商业活动，应事先购买正式文本或得到协会书面授权。购买 本文件或获得授权，请与协会联系。 欢迎社会各界举报侵权盗版行为，协会将依法严格保护举报人信息。 联系人：范红梅 联系电话： 0531-89701986 15668365153 联系邮箱： [email protected] 协会对本版权声明拥有最终解释权。 I 全国团体标准信息平台 T/SDAQI 010— 2021 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020 《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由山东质量检验协会提出并归口。 本文件起草单位：山东省食品药品检验研究院、山东理工大学 本文件主要起草人： 田洪芸、孔玲、王冠群、陈志伟、王骏、提靖靓、刘青、刘东武、桑锋、任雪 梅 本文件的所有权和解释权归山东质量检验协会。 如果您在本文件使用中发现错误或技术内容有不当之处，请及时与协会秘书处联系，将意见发送到 [email protected] II 全国团体标准信息平台 T/SDAQI 010— 2021 牛奶中致敏原（ α-乳白蛋白和 β-乳球蛋白）快速检测 电化学传感 器法 1 范围 本文件规定了牛奶（生乳、巴氏杀菌乳、灭菌乳）中致敏原 （α-乳白蛋白和 β-乳球蛋白） 的快速检 测电化学传感器法。 本文件适用于牛奶（生乳、巴氏杀菌乳、灭菌乳）中致敏原 （α-乳白蛋白和 β-乳球蛋白） 的快速检 测。 2 规范性引用文件 本文件中引用的文件对本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适 用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 基于牛奶中致敏原（α -乳白蛋白和 β-乳球蛋白）与其抗体的特异性识别，结合光电化学（ PEC）生 物传感器技术，根据光电化学（PEC ）反应过程中的光电流变化与目标物浓度之间的关系，可实现牛奶 致敏原（α -乳白蛋白、 β-乳球蛋白）的定量检测。 4 试剂 除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，实验用水为 GB/T 6682规定的二级水。 4.1 试剂 4.1.1 二氧化钛（TiO 2）（40 nm），≥99.8% ，金属基 。 4.1.2 L-抗坏血酸（ C6H8O6）。 4.1.3 α -乳白蛋白 ，≥85% 。 4.1.4 β -乳球蛋白，≥ 90%。 4.1.5 酪蛋白。 4.1.6 免疫球蛋白 G（IgG），≥95% 。 1 全国团体标准信息平台 T/SDAQI 010— 2021 4.1.7 α-乳白蛋白抗体（ 1 mg/mL）。 4.1.8 β-乳球蛋白抗体 （1 mg/mL ）。 4.1.9 牛血清白 蛋白（BSA） ，生物技术级， 96%。 4.1.10 三羟甲基氨基甲烷 （C 4H11NO 3）， ≥ 99%。 4.1.11 盐酸多巴胺（ C8H11NO 2·HCl），98%。 4.1.12 磷酸二氢钾（KH 2PO 4）。 4.1.13 十二水合 磷酸氢二钠 （Na 2HPO 4·12H 2O）。 4.1.14 无水乙醇 （C 2H5OH）。 4.1.15 3 -氨丙基三乙氧基硅烷（ APTES，C 9H23NO 3Si），99%。 4.1.16 盐酸（HCl ） ，优级纯。 4.2 试剂配制 4.2.1 ITO电极的制备：切割 ITO导电玻璃（ 2.5×0.8 cm2） ，依次用乙醇、丙酮超声清洗各 30 min，后将 清洗后用氮气吹干， 60 ℃干燥 24 h后储藏备用。 4.2.2 二氧化钛悬浮液（7 mg / mL ）：将商品化二氧化钛样品用石英研钵研碎，备用。称取 70.0 mg二 氧化钛，用水溶解，并稀释至 10 mL。 4.2.3 抗坏血酸溶液（0.1 m ol / L） ：精确称取取抗坏血酸 1.761 g，用水溶解，并稀释至 100 mL，现配现 用。 4.2.4 PDA 的制备： 精确称取 1.211g三羟甲基氨基甲烷， 在磁力搅拌下溶解在 50 mL水中，配制成 0.1 mol/L 溶液，并用 HCl调节 pH至8.5后，加水定容至 100 mL，现配现用。 4.2.5 PBS 缓冲溶液（pH=7.4） ：甲液：称取 23.88 g十二水磷酸氢二钠，用水定容至 1000 mL；乙液： 称取 9.08 g磷酸二氢钾 ，用水定容至 1000 mL。将甲液与乙液混合，配制成 pH为7.4的PBS缓冲溶 液。 4.2.6 牛血清白蛋白溶液（1% ） ：精确称取 0.01 g BSA ，溶于 0.99 g水中。 4.2.7 抗体浓度的配制 ：量取 1 mg/mL 的α-乳白蛋白抗体/ β-乳球抗体 10 μL溶于 990 μL水中，制得 10 μg/mL α-乳白蛋白/β -乳球蛋白抗体溶液 。 4.2.8 α-乳白蛋白 （0.01 ng/mL ）溶液：精确 称取 α-乳白蛋白 1.00 mg，溶于 1 mL水，配制成 1 mg/mL 的α-乳白蛋白溶液，记作溶液 1。取 0.5 mL溶液 1，加入 0.5 mL水，配制成 500 μg/mL α -乳白蛋白溶 液，记作溶液 2。取 0.2 mL溶液 2，加入 0.8 mL水，配制成 100 μg/mL α -乳白蛋白溶液，记作溶液 3。 2 全国团体标准信息平台 T/SDAQI 010— 2021 取0.2 mL溶液 3，加入 0.8 mL水，配制成 20 μg/mL α -乳白蛋白溶液，记作溶液 4。取 0.05 mL溶液 4， 加入 0.95 mL水，配制成 1 μg/mL α -乳白蛋白溶液，记作溶液 5。取 0.5 mL溶液 5，加入 0.5 mL水，配 制成 500 ng/mLα -乳白蛋白溶液，记作溶液 6。取 0.5 mL溶液 6，加入 0.5 mL水，配制成 250 ng/mL α - 乳白蛋白溶液，记作溶液 7。取 0.4 mL溶液 7，加入 0.6 mL水，配制成 100 ng/mL α -乳白蛋白溶液，记 作溶液 8。取 0.5 mL溶液 8，加入 0.5 mL水，配制成 50 ng/mLα -乳白蛋白溶液，记作溶液 9。取 0.5 mL 溶液 9，加入 0.5 mL水，配制成 25 ng/mLα -乳白蛋白溶液，记作溶液 10。取 0.4 mL溶液 10，加入 0.6 mL水，配制成 10 ng/mL α -乳白蛋白溶液，记作溶液 11。取 0.5 mL溶液 11，加入 0.5 mL水，配制成 5 ng/mLα -乳白蛋白溶液，记作溶液 12。取 0.2 mL溶液 12，加入 0.8 mL水，配制成 1 ng/mL α -乳白蛋白 溶液，记作溶液 13。取 0.5 mL溶液 13，加入 0.5 mL水，配制成 0.5 ng/mLα -乳白蛋白溶 液，记作溶液 14。取 0.2 mL溶液 14，加入 0.8 mL水，配制成 0.1 ng/mL α -乳白蛋白溶液，记作溶液 15。取 0.5 mL 溶液 15，加入 0.5 mL水，配制成 0.05 ng/mL α -乳白蛋白溶液，记作溶液 16。取 0.5 mL溶液 16，加入 0.5 mL水，配制成 0.025 ng/mL α -乳白蛋白溶液，记作溶液 17。取 0.4 mL溶液 11，加入 0.6 mL水，配 制成 0.01 ng/mL α -乳白蛋白溶液，记作溶液 18。 4.2.9 β-乳球蛋白 （0.01 ng/mL ）溶液：精确 称取 β-乳球蛋白 1.00 mg，溶于 1 mL水，配制成 1 mg/mL 的 β-乳球蛋白溶液，记作溶液 1。取 0.5 mL溶液 1，加入 0.5 mL水，配制成