ICS 03.120.10 A 00 DB51 四 川 省 地 方 标 准 DB51/T 2166—2016 微生物检测领域培养基和试剂验证指南 2016 - 05 - 18 发布 四川省质量技术监督局 2016 - 10 - 01 实施 发 布 DB51/T 2166—2016 目 次 前 言 ............................................................................... II 引 言 .............................................................................. III 1 范围 .............................................................................. 1 2 规范性引用文件 .................................................................... 1 3 术语和定义 ........................................................................ 1 4 培养基和试剂的质量要求及其检查方法 ................................................ 3 5 生长率测试 ........................................................................ 4 6 选择性 ............................................................................ 7 7 生化特性 .......................................................................... 9 附录 A（资料性附录） 微生物检验标准中指定的培养基成分 ............................... 12 附录 B（资料性附录） 常用质控菌株中文名和学名一览表 ................................. 13 附录 C（资料性附录） 常见培养基验证标准 ............................................. 14 参考文献 ............................................................................ 26 I DB51/T 2166—2016 前 言 本标准为实验室质量管理和技术运作类标准，建议实验室将该标准与下列实验室质量管理和技术运 作系列标准结合起来使用。 微生物检测实验室安全管理指南 微生物检测领域设施和环境条件监测指南 微生物检测实验室废弃物处置指南 标准菌株的保存和使用指南 微生物检测领域培养基和试剂管理指南 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则进行起草。 本标准由四川省产品质量监督检验检测院提出并归口。 本标准由四川省质量技术监督局批准。 本标准由四川省产品质量监督检验检测院负责解释。 本标准起草单位: 四川省产品质量监督检验检测院，成都市食品药品监督管理局，四川省食品药品 检验检测院，成都市疾病预防控制中心 本标准主要起草人：时炜，郑卫东，黄薇，黄瑛，文永勤。 II DB51/T 2166—2016 引 言 培养基和试剂的质量是微生物检测的关键。只有其质量符合标准或满足最低性能要求，才能保证试 验结果的准确性和可靠性。 本标准提出微生物检测领域培养基和试剂验证的指南，旨在为实验室提供管理的科学路径，以满足 相关要求。 III DB51/T 2166—2016 微生物检测领域培养基和试剂验证指南 1 范围 本标准提出了微生物检测领域培养基和试剂的质量要求和验证方法。 本标准适用于微生物检测领域市售和自制培养基和试剂的质量要求和性能测试。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 DB51/T 2158 实验室服务和供应品采购管理指南 3 术语和定义 3.1 液体培养基 liquid culture medium 一种或多种成分的水溶液。 注：液体培养基如蛋白胨水、营养肉汤等。试管、三角瓶或瓶子中的液体培养基一般称为“肉汤”。 3.2 固体培养基 solid culture medium 在液体培养基中加入一定量固化物，冷却后凝固成固体状态的培养基。 注1：固化物如琼脂、明胶等 注2：倾注到平皿内的固体培养基一般称之为“平板” ； 倒入试管并摆放成斜面的固体培养基，当培养基凝固后 通常称作“斜面”。 3.3 半固体培养基 semi-solid liquid culture medium 在液体培养基中加入一定量固化物，冷却后凝固成半固体状态的培养基。 3.4 运输培养基 transport medium 在取样后和实验室处理前保护和维持微生物活性且不允许明显增殖的培养基。 注：运输培养基中通常不允许包含使微生物增殖的物质，但是培养基应能保护菌株。典型的运输培养基如缓冲甘 油-氯化钠溶液运输培养基。 3.5 保藏培养基 preservation medium 1 DB51/T 2166—2016 用于在一定期限内保护和维持微生物活力，防止长期保存的不利影响，或使其在长期保存后容易复 苏的培养基。 注：保藏培养基如营养琼脂斜面。 3.6 复苏培养基 resuscitation medium 能够使受损或应激的微生物修复，使其恢复正常生长能力，但不一定促进其繁殖的培养基。 3.7 增菌培养基 enrichment medium 通常为液体培养基，能够给微生物的繁殖提供特定的生长环境。 3.8 选择性增菌培养基 selective enrichment medium 能够允许特定的微生物在其中繁殖，而部分或全部抑制其他微生物生长的培养基。 注：选择性增菌培养基如TTB培养基。 3.9 非选择性增菌培养基 non-selective enrichment medium 能够保证多种微生物生长的培养基。 注：非选择性增菌培养基如营养肉汤。 3.10 分离培养基 isolation medium 支持微生物生长的固体或半固体培养基。 3.11 选择性分离培养基 selective isolation medium 支持特定微生物生长而抑制其他微生物生长的分离培养基。 注：选择性分离培养，如XLD琼脂。 3.12 鉴别培养基(特异性培养基) differential medium 能够进行一项或多项微生物生理和（或） 生化特性鉴定的培养基。 注1：鉴别培养基如麦康凯琼脂。 注2：能够用于分离培养的鉴别培养基被称作分离（鉴别） 培养基，如XLD琼脂。 3.13 计数培养基 count medium 能够对微生物定量的选择性或非选择性培养基。 注1：能够对微生物定量的选择性培养基如MYP琼脂，能够对微生物定量的非选择性培养基如平板计数琼脂； 注2：计数培养基可包含复苏和(或) 增菌培养基的特性。 2 DB51/T 2166—2016 3.14 测试菌株 testing culture 通常用于培养基性能测试的微生物。 注： 测试菌株可按其来源进行进一步定义。 3.15 标准菌株 reference strain 直接从官方菌种保藏机构获得并至少定义到属或种水平的菌株,按菌株特性进行分类和描述。 注： 标准物质是指在均一固定的浓度中含有具活性的定量化菌种，经证明的标准物质是指其浓度已经证明。 3.16 工作菌株 working culture 由标准储备菌株、储备菌株或标准菌株（经证明或未经证明）转接一代获得的菌株。 4 培养基和试剂的质量要求及其检查方法 培养基和试剂的质量要求包括理化特性要求和微生物学要求。实验室应检查培养基和试剂的质量是 否满足要求。 注：培养基和试剂的质量由基础成分的质量、制备过程的控制、微生物污染的消除、包装和储存条件等因素决定。 4.1 理化特性要求 培养基和试剂的理化特性应满足相关标准的要求，以下特性的质量评估结果应符合相应的规定： ——分装的量和（或）厚度； ——外观，色泽和均一性； ——琼脂凝胶硬度； ——水分含量； ——20 ℃～25 ℃的 pH； ——缓冲能力 注：国家标准中提到的培养基通常可以直接使用。但因其中一些培养基成分(见附录A) 质量不稳定，可允许对其用 量进行适当的调整，如： ——根据营养需要改变蛋白胨、牛肉浸出物、酵母浸出物的用量； ——根据所需凝胶作用的效果改变琼脂的用量； ——根据缓冲要求决定缓冲物质用量； ——根据选择性要求决定胆盐、胆汁抽提物和脱氧胆酸盐、抗菌染料的用量； ——根据抗生素的效价决定其用量。 4.2 4.2.1 微生物学 总则 培养基和试剂的微生物学要求包括微生物污染的控制要求和生长特性要求。 4.2.2 实验室应按批量的不同，选择适量的培养基在适当条件下培养，检测其微生物污染。通常的做 法是：在一个时段内，至少要对初始制备的一批和最终制备的一批培养基的污染情况进行检测，且在同 3 DB51/T 2166—2016 一批培养基中至少应抽取或制备一个平板或试管，或按批量的 1%决定抽取或制备的平板或试管数量， 并置于 37 ℃培养 18 h 或按特定标准中规定的温度和时间进行培养。 注：本条款只适用于即用型培养基。 4.2.3 生长特性要求包括生长率、选择性、生化特性。实验室应根据培养基或试剂的用途，选择能代 表整批产品的样品，使用测试菌株（常用测试菌株见附录 B）对培养基或试剂进行测试。 4.2.4 对不含指示剂和选择剂的培养基，通常只需采用测试菌株进行生长率测试；对含有选择剂的培 养基或试剂，应使用能证明其选择作用的测试菌株进行选择性测试；对含有指示剂的培养基或试剂，应 使用能证明其指示作用的测试菌株进行生化特性试验。 测试方法包括定量方法、半定量方法、定性方法。常见培养基的生长特性测试见附录 C。 注1：采用定量方法时，应使用参考培养基进行对照；采用半定量和定性方法时，使用参考培养基或能得到“阳性” 结果的培养基进行对照有助于结果的解