ICS 65.020.30 B 44 中华人民共和国国家标准 GB/T14926.52—2001 实验动物 免疫荧光试验 Laboratory animalImmunofluorescence assay (IFA) 2001-08-29发布 2002-05-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 GB/T 14926.52—2001 前 言 本标准修订了GB/T14926.18—1994《实验动物 淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒检测方法》中的免 疫荧光试验方法，将其作为一个独立标准列出。 本标准由中华人民共和国科学技术部提出并归口。 本标准起草单位：中国实验动物学会。 本标准主要起草人：贺争鸣。 中华人民共和国国家标准 GB/T14926.52—2001 实验动物免疫荧光试验 Laboratory animalImmunofluorescenceassay(IFA) 1范围 本标准规定了免疫荧光试验（IFA）所用试剂、器材和操作步骤等 本标准适用于实验动物病毒抗体的检测。 2原理 含有病毒抗原的细胞（组织培养细胞或动物组织细胞）固定于玻片上，遇相应抗体形成抗原抗体复 合物。此抗原抗体复合物仍保持其抗原活性，可与相应的第二抗体荧光素结合物结合。荧光素在紫外 光或蓝紫光的照射下，可激发出可见的荧光。因此，在荧光显微镜下以荧光的有无和强弱判定结果。 3主要试剂与器材 3.1试剂 3.1.1抗原片的制备 将病毒接种于敏感细胞上（见表1），待细胞出现病变或确知细胞内含有丰富的病毒抗原后，用胰酶 消化下细胞，PBS洗涤三次，用适量PBS悬浮细胞，将细胞悬液滴于玻片孔中。同时消化未感染病毒的 同批细胞，滴加同一玻片另一孔内，作为正常细胞对照。孔内滴加的细胞以细胞铺开、不重叠为宜。室 温干燥后，冷丙酮（4℃）固定10min。PBS漂洗后，充分干燥，置于一20℃备用。在一20℃条件下可保 存一年。 3.1.2羊或兔抗小鼠、大鼠、地鼠、豚鼠、免、犬或猴IgG异硫氰酸荧光素结合物，使用时用含0.01%~ 0.02%伊文思蓝PBS稀释至适当浓度。 3.1.3阳性血清 用病毒抗原免疫清洁或SPF小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠或普通级兔、犬、猴所获得的抗血清；或自然感 染恢复后的犬、猴血清。 3.1.4阴性血清 清洁或SPF小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠血清；或确认无相应病毒感染的兔、犬、猴血清 3.1.5 PBS(0.01 mol/L,pH7.4) 氯化钠 8g 氯化钾 0. 2 g 0.2 g 磷酸二氢钾 磷酸氢二钠（NazHPO4·12H,O) 2.83 g 蒸馏水 加至1000mL 3.1.650%甘油PBS 甘油 5 mL PBS(0. 01 mol/L,pH7.4) 5 mL 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局2001-08-29批准 2002-05-01实施