ICS 11.040.99
Q 8435
团体标 准
T/SZAS 19—2020
游离DNA保存管
Cell-free DNA collection tube
2020 - 06 - 11发布 2020 - 07 - 12实施
深圳市标准化协会 发布
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T/SZAS 19—2020
I 目 次
前言 ................................ ................................ ................ II
1 范围 ................................ ................................ .............. 1
2 规范性引用文件 ................................ ................................ .... 1
3 术语和定义 ................................ ................................ ........ 1
4 要求 ................................ ................................ .............. 2
5 试验方法 ................................ ................................ .......... 3
6 检验规则 ................................ ................................ .......... 4
7 色标、生产商提供的信息、运输及贮存、保质期 ................................ ........ 4
参考文献 ................................ ................................ ............. 6
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II 前 言
本标准按照 GB/T 1.1-2009给出的规则起草。
本标准由深圳 华大临床检验中心提出。
本标准由深圳 市标准化协会 归口。
本标准起草单位: 深圳华大临床检验中心、 深圳华大基因股份有限公司、 江苏康为世纪生物科技有
限公司、广州基赛生物科技有限公司 、深圳市柏明胜医疗器械有限公司 。
本标准起草人: 沈建坤、彭智宇、张红云、唐美芳、许振朋、向嘉乐、方星星、张镜悬、殷剑峰 。
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1 游离DNA保存管
1 范围
本标准规定了游离 DNA保存管(或称游离 DNA采血管)的 产品要求和 试验方法 。
本标准适用于 游离 DNA相关研究及实验的血液采集(如 NIPT)以及游离 DNA保存管制造商和 通过
保存人体静脉血样提取游离 DNA进行相关检测的生物 检测机构。
2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅所注日期的版本适用于本文
件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
WS/T 224 -2018 真空采血管的性能验证
YY 0314 -2007 一次性使用人体静脉血样采集容器
3 术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1
游离DNA cell -free DNA
存在于外周循环血中游离于细胞外的部分降解了的机体内源性 DNA。
3.2
添加剂 additive
在一个标本采集器中,添加的用来达到预期效果的试剂。
3.3
保存管 tube
带有附加物、添加剂用于盛装样本的器皿。
3.4
管盖 tube cap
密闭容器的盖子,包含内置胶塞和外部的管帽。
3.5
保水性 water-retaining property
容器在液体的保存 和防止液体流失、挥发 方面的性能。
3.6
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2 目力检测 visual inspection
检测者通过正常或矫正视力进行检测。
3.7
NIPT Noninvasive prenatal testing
无创产前检测 。
4 要求
4.1 材料及结构
4.1.1 保存管管体应透明无杂质,无变形损坏,表面应光滑,无锐边、毛刺、裂纹、脏污。
4.1.2 保存管的塞子不应松动 ,塞子与管紧密结合; 应能经受 4次取下和装上塞子,不出现泄漏 。
4.1.3 需要对保存管的材料和预期的适用性进行确认,充分考虑保存管材料的可承受离心力、耐压、
防摔、抗冻性能。在预期的实验条件下,保存管应无断裂、塌陷、破裂或其他可见损坏。
4.2 添加剂
4.2.1 应充分考虑添加剂的稳定性、可放置的时间、对温度和光照的敏感性。
4.2.2 若添加剂为液体,应充分考虑保存管的保水性,防止管内添加剂损失。添加剂 应澄清透明、无
沉淀、无悬浊物, 不应有变色、结晶 和体积变少等现象。
4.2.3 添加剂的体积应在 规定体积的 90%-110%之间。
4.3 无菌状态
游离 DNA保存管用于采集检测者的血液,容器内部与检测者血流之间有直接接触的可能,产品要
求无菌。
4.4 抽吸量
抽吸量应在公称液体容量的 90%-110%之间。
4.5 保存时间
游离 DNA保存管可 有效保存血液中游 离DNA至少 4天。
4.6 凝血和溶血要求
4.6.1 保存管采血后,充分混匀的样本中不应出现凝块。
4.6.2 保存管采血后进行离心,血浆不应出现溶血现象。
4.7 游离DNA保存效果
4.7.1 使用保存管收集并离心获得的血浆, 进行血浆游离 DNA提取, 每 500μL血浆中获得的游离 DNA
应不少于 2ng(除提取因素外) 。
4.7.2 对提取的游离 DNA进行片段大小检测 ,主峰应在 166bp左右,无大片段 污染。
4.7.3 临床检测项目可根据该项目的 行业或企业标准来判定是否满足临床检测需求。
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3 5 试验方法
5.1 材料及结构
5.1.1 保存管外观 采用目测方法进行 检测。
5.1.2 荧光泄漏实验方法参考 YY 0314 -2007 附录 C。
5.1.3 管体强度检测方法参考 WS/T 224 —2018 4.3
5.2 添加剂
5.2.1 添加剂是否变色、结晶 采用目测方法进行 检测。
5.2.2 添加剂体积测量方法
5.2.2.1 仪器
离心机、移液枪。
5.2.2.2 试验步骤
5.2.2.2.1 随机抽取 3支保存管,放置 于离心机中, 3000 g离心1min,取下保存管。
5.2.2.2.2 轻轻打开保存管的管盖,使用移液枪 缓慢吸取添加剂,调节移液枪排空空气, 此时移液枪
上的体积即为添加剂体积。
5.3 无菌状态
无菌及验证方法 按WS/T 224 -2018中4.7条规定的方法进行检测 。
5.4 抽吸量
抽吸量的验证方法 按WS/T 224 —2018中4.2条规定的方法进行检测 。
5.5 凝血和溶血要求
5.5.1 按照正确的步骤进行采血,保存管中充分混匀的血液标本在显微镜下观察应无凝块。
5.5.2 保存管采血后进行离心, 目力检测上层血浆, 不应出现溶血 现象(临床原因除外)。
5.6 游离DNA保存效果
5.6.1 保存管对游离 DNA的保存效果 受到采血后样本保存的时间、样本保存的温度、保存管批次等方
面的影响,需要对保存管的性能进行充分验证 :
a) 模拟临床样本的采集、 运输及实验过程, 比较在预定的条件和采集样本后立即检测两种情况下,
通过对比实验参数判断保存管在预定的条件下是否满足要求。
b) 模拟临床样本的采集、运输及实验过程,通过比较考察管与比对管的差异,进行保存管的性能
验证,必要时可建立新的样本采集、运输及保存的方式。
5.6.2 检测方法
5.6.2.1 仪器
低温离心机、 Qubit荧光定量仪、 Agilent 2100 生物分析仪 。
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4 5.6.2.2 试剂
游离 DNA提取试剂、 Qubit™ dsDNA H S Assay Kit 、Agilent 2100 生物分析仪配套芯片和试剂 。
5.6.2.3 检测步骤
5.6.2.3.1 采集 3例以上血液样本。
5.6.2.3.2 将保存管在4℃条件下 1,600 g离心 10分钟,将上 清转移至新的离心管中,注意不要吸取
到中间层白细胞; 将所得上清 在4℃条件下 16,000 g离心 10分钟,将 血浆转移到一个新的离心管中备
用。
5.6.2.3.3 使用游离 DNA提取试剂从 500μL血浆中的提取游离 DNA。
5.6.2.3.4 使用 Qubit荧光定量仪检测游离 DNA的浓度。
5.6.2.3.5
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