ICS65.020.20 CCSB05T/SBZYC 团体标准 T/SBZYC01-2021 地理标志产品施秉太子参 组织培养与脱毒种苗扩繁技术规程 2021—11—08发布 2021—12—01实施 施秉县牛大场镇中药材协会发布 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 T/SBZYC01-2021 I目次 前言.......................................................................................................................................................................II 1范围.....................................................................................................................................................................1 2规范性引用文件.................................................................................................................................................1 3术语和定义.........................................................................................................................................................1 4组织培养.............................................................................................................................................................1 5驯化.....................................................................................................................................................................3 6扩繁.....................................................................................................................................................................4 全国团体标准信息平台 T/SBZYC01-2021 II 前言 本文件按照GB/T1.1-2020《文件化工作导则第1部分文件的结构和编写》给出的规则起草； 请注意：本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本文件由施秉县牛大场镇中药材协会提出归口； 本文件由本文件由黔东南州农业科学院、施秉县农业农村局、施秉县中药材产业发展中心、贵州三 泓药业股份有限公司、贵州省黔康生态科技农业发展有限责任公司、贵州徽贵药业有限公司起草； 本文件主要起草人：陈建祥、左群、陈秀德、舒礼华、蒋永英、蒋祥勇、王燕。 全国团体标准信息平台 T/SBZYC01-2021 1 地理标志产品施秉太子参组织培养与脱毒种苗扩繁技术规程 1范围 本规程规定了地理标志产品施秉太子参组织培养技术术语和定义，组织培养、驯化、扩繁。 本规程适用于地理标志产品施秉太子参脱毒组培苗生产、扩繁。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB437硫酸铜（农用）。 GB5749生活饮用水卫生标准。 GB19489实验室生物安全通用要求。 GB/T317白砂糖 GB/T603化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备。 GB/T628化学试剂硼酸。 GB/T647化学试剂硝酸钾。 GB/T659化学试剂硝酸铵。 GB/T664化学试剂七水合硫酸亚铁（硫酸亚铁）。 GB/T666化学试剂七水合硫酸锌（硫酸锌）。 GB/T671化学试剂硫酸镁。 GB/T1272化学试剂碘化钾。 GB/T1274化学试剂磷酸二氢钾。 GB/T1401化学试剂乙二胺四乙酸二钠。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法。 GB/T15899化学试剂一水合硫酸锰（硫酸锰）。 GB/T22278良好实验室规范原则。 T/SBZYC02地理标志产品施秉太子参种植技术规程 3术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3.1 脱毒组培苗 选用优良太子参植株茎尖、茎段作为外植体，采用植物组织培养技术，培养再生出来的脱毒试管苗。 4组织培养 全国团体标准信息平台 T/SBZYC01-2021 24.1组培室要求 符合GB19489和GB/T22278规定。 4.2培养基选择 以MS为基础培养基，所用药品符合GB437、GB/T628、GB/T647、GB/T659、GB/T664、GB/T666、GB/T671、 GB/T1272、GB/T1274、GB/T1401、GB/T15899的规定。 4.3培养基制备 4.3.1母液配制和保存 将培养基配方扩大若干倍，一般为10倍~100倍的浓缩液体。药品配制严格按照GB/T603规定方法 配制，用水应符合GB/T6682规定要求。称取药品的药匙必须专药专用。将配制好的母液分别贴上标签， 注明母液名称、配制倍数和日期，贮存在2℃~4℃的冰箱中，贮藏时间控制在90d内。储藏期间，如有 霉菌和沉淀产生，需重新配置。 4.3.2植物生长调节剂母液配制和保存 将各种植物生长调节剂单独配成浓度为50mg/100mL~100mg/100mL。多数植物生长调节剂难溶于水， 其溶解方法：NAA、IBA、IAA等常用少量95%的乙醇溶解，然后加热溶解，再加蒸馏水定容。6-BA、KT 等先用少量1mol/L盐酸溶解，再加蒸馏水定容。所用水要符合GB/T6682的要求。 配制好植物生长调节剂分别贴上标签，标签写上名称、配制浓度和日期，贮存在2℃~4℃的冰箱中， 贮藏时间控制在90d内。储藏期间，如有霉菌和沉淀产生，需重新配置。 4.3.3培养基配制 培养基由MS基础培养基、蔗糖、琼脂、水组成，蔗糖和水分别符合GB317和GB5749规定。所需 蔗糖浓度3g/L，琼脂粉浓度4g/L。培养基配制流程，见图1。 水分 母液 生长调节剂 蔗糖 琼脂→混合→加热溶解→定容→调节pH 分↓装 培养容器→洗涤→干燥→ 播种←凝固←冷却←高压灭菌←封口 图1太子参培养基的配制流程图 4.3.3.1诱导培养基为:MS+6-BA0～1.0+NAA0～0.1，按照培养基配制程序配制。 4.3.3.2继代增殖培养基为:MS+6-BA0.5～1.5+NAA0.01～0.1，按照培养基配制程序配制。 4.3.3.3壮苗及生根培养基为:MS+6-BA0+NAA0，按照培养基配制程序配制。 4.3.4pH值调节 太子参培养基最佳pH值控制在5.6~5.8，一般用pH计或pH试纸测试，常用（1mol/L）NaOH或 HCl进行调整。 4.3.5培养基分装和灭菌 全国团体标准信息平台 T/SBZYC01-2021 3 将配制好的培养基趁热分装，分装量以占培养容器的1/4～1/3为宜。操作时，尽量避免将培养基 粘到容器口和容器壁上，否则容易引起污染。将已分装好培养基封口并注明配制日期和培养基种类后即 进行灭菌，灭菌锅内压力为0.105MPa、温度达121℃状态下保持15min～20min进行灭菌。 4.4环境灭菌 对环境进行定期灭菌。方法是用75%乙醇或0.1%新吉尔灭进行喷洒。对无菌操作室（接种室）、培 养室和准备室采用紫外灯灭菌方法。接种所用的超净工作台在空气过滤灭菌的基础上再配合使用紫外灯 照射灭菌20min~30min，再用75%乙醇对超净工作台表面进行擦拭。 4.5接种工具灭菌 接种用的工具、无菌水等必须在灭菌锅内压力为0.105MPa、温度达121℃状态下保持15~20min 进行灭菌。 4.6外植体选择与处理 4.6.1选择生长健壮、无病虫害的优良太子参植株为外植体材料。 将太子参的茎尖、茎段用5%~10%洗衣粉漂洗2min~3min，洗去茎尖、茎段上的蜡质层及泥土、粉 尘，用自来水冲洗30min后拿到接种室，用75%酒精表面消毒20s，无菌水冲洗2次；再用0.1%Hg消 毒3min~8min，无菌水冲洗8次~10次，以除去残留消毒液。 4.7外植体诱导培养 将处理好的太子参外植体，在无菌条件下，用解剖刀和解剖针在显微镜下剥离0.5mm~1mm的茎尖， 切取茎段（每段留一个节），分别接种于诱导培养基。茎尖、茎段应插入培养基，芽不能陷入培养基中。 接种后做好标记。经7d~10d培养，芽开始萌动生长，30d后芽长到1cm~2cm，同时有少量丛芽分化。 4.8继代