ICS 11.100 CCS C 44 浙 江 测 试 人乳头状瘤病毒（ Detection of human papillomavirus 2021 - 12 - 20发布 浙江省分析测试协会 ZJATA 浙 江 测 试 团 体 T/ ZJATA 人乳头状瘤病毒（ HPV ）核酸检测 -化学发光法 Detection of human papillomavirus （HPV ）nucleic acid — Hybrid （报批稿） 浙江省分析测试协会 发 布 ZJATA 团 体 标 准 ZJATA 0005 —2021 ）核酸检测 杂交捕获 Hybrid capture - CLIA 2022 - 01 - 20实施 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 T/ZJATA 0005 — 2021 I 目 次 前言 ................................................ ................................. II 1 范围 ............................................. .................................. 1 2 规范性引用文件 ........................................ ............................. 1 3 术语和定义 .......................................... ............................... 1 4 缩略语 ............................................ ................................. 1 5 方法原理 ........................................... ................................ 1 6 仪器设备、试剂或材料 ..................................... .......................... 2 6.1 仪器设备 ......................................... .............................. 2 6.2 试剂或材料 ........................................ ............................. 2 7 样本 ............................................. .................................. 3 8 检测步骤 ........................................... ................................ 3 8.1 总则 ........................................... ................................ 3 8.2 准备 ........................................... ................................ 3 8.3 变性 ........................................... ................................ 3 8.4 杂交 ........................................... ................................ 4 8.5 捕获 ........................................... ................................ 4 8.6 检测 ........................................... ................................ 4 8.7 化学发光 ......................................... .............................. 4 8.8 有效性检测 ........................................ ............................. 4 9 检测报告 ........................................... ................................ 5 附录 A（规范性） HPV 样本 ................................... .......................... 6 附录 B（规范性） 检测步骤中涉及的操作要求 ............................ ................. 7 参考文献 .............................................. ................................ 8 全国团体标准信息平台 T/ZJATA 0005—2021 II 前 言 本文件按照 GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本文件由浙江省分析测试协会提出并归口。 本文件起草单位：杭州德同生物技术有限公司、湖州市南浔区佰通标准化研究院。 本文件主要起草人：韩斌、寿莹佳、华绍炳、石林、周晨楠。 全国团体标准信息平台 T/ZJATA 0005 — 2021 1 人乳头状瘤病毒（HPV）核酸检测 杂交捕获-化学发光法 警示——使用本文件的人员应有正规实验室工作的实践经验。 本文件并未指出所有可能的安全问题。 使 用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关法规规定的条件。 1 范围 本文件规定了基于杂交捕获和化学发光的人乳头状瘤病毒 （ HPV ） 核酸检测方法的缩略语、 方法原 理、仪器设备、试剂或材料、样本、检测步骤和检测报告。 本文件适用于采用杂交捕获—化学发光原理进行人乳头状瘤病毒（ HPV ）的核酸检测。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件； 不注日期的引用文件， 其最新版本 （包括所有的修改单） 适用于本 文件。 GB 19489 实验室 生物安全通用要求 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 变性 denaturation 在物理或化学因素的作用下，维系核酸二级结构的氢键和碱基堆积力受到破坏，DNA由双链解旋为 单链的过程。 3.2 杂交 hybrid 互补的单链核苷酸序列通过碱基配对以非共价键形式形成稳定双链结构的过程。 3.3 捕获 capture 杂交形成的DNA -R NA杂 合 双链 被特异 性识别该结构的 抗体 捕获 至固相载体 的过程。 3.4 化学发光 chemiluminescence,CL 由于化学 反 应 产 生 电子 能级 处 于 激 发 态 的物 质 ， 后者 通过 跃迁释放 能 量产 生光 子 ， 从 而导 致 的发光 现象 。 [来源 ： YY/T 1161 — 2009 , 3.1 ] 4 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 CV : 变 异 系 数(Coefficient of Variation ) DNA :脱氧 核 糖 核酸（ Deoxyribonucleic Acid ） HPV : 人乳头状瘤病毒（ Human Papillomavirus ） RNA : 核 糖 核酸（ Ribonucleic Acid ） TBS :三乙醇胺缓冲盐溶液( Tris Buffered Saline ) 5 方法原理 全国团体标准信息平台 T/ZJATA 0005—2021 2 样本中的人乳头状瘤病毒双链 DNA 经 变性试剂 处 理 后 分解成单链。 单链 DNA 与特异 性 RNA 探针 结 合 形成 DNA-RNA 杂 合体 。该 DNA-RNA 杂 合体与 捕获 微孔板上 包 被 的 特异 性 抗体 结 合固 定在捕获 微孔板上 ， 再与偶联 有碱性 磷 酸 酶 的 抗 DNA-RNA 杂 合体 的 特异 性 抗体 结 合 。 随后加入 检测 底 物，碱 性 磷 酸 酶促使底 物发光，定性检测样本中的人乳头状瘤病毒核酸。通过 判读底 物化学发光 信号 的 强弱 ， 可 推算 出样本中的病毒核酸 含量 ， 进而提 示相 对病毒 载量