1 0 T/CAIA 中国分析测试协会标准 T/CAIA/SHO16-2021 工业大麻 大麻二酚、大麻二酚酸含量测 定 高效液相色谱法 Industrial hemp - determination of cannabidiol and cannabinolic acid - high performance liquid chromatography 2021-12-25 发布 2022-02-01 实施 中国分析测试协会发布 全国团体标准信息平台 2 目 次 前言 ................................ ................................ ................ II 1 范围 ................................ ................................ ................ 2 2 规范性引用文件 ................................ ................................ ..... 2 3 术语与定义 ................................ ................................ ........ 2 4 原理 ................................ ................................ ............... 2 5 试剂和材料 ................................ ................................ .......... 2 6 仪器和设备 ................................ ................................ ......... 3 7 分析步骤 ................................ ................................ ........... 3 8 结果计算与表示 ................................ ................................ .......3 9 精密度 ................................ ................................ ............. 4 10 附录A ................................ ................................ .............. 6 全国团体标准信息平台 T/CAIA/SH016-2021 I 前 言 本文件按照 GB/T 1.1 -2020给出的规则起草。 本文件由 中国分析测试协会标准化委员会提出并归口。 本文件起草单位：齐齐哈尔大学、中国标准化研究院、福州海关技术中心、中国中医科学院中药 研究所、中国食品药品检定研究院、苏州汇 通色谱分离纯化有限公司、华东理工大学 本文件主要起草人：王丹、赵明、云振宇、兰韬、李军、席兴军、时志春、杨方、李慧、王海 燕、初侨、孙立秋、张维冰、初红涛、戈兆松、于聪聪、孙冬梅 全国团体标准信息平台 T/CAIA/SH016-2021 2 工业大麻 大麻二酚、大麻二酚酸含量测定 高效液相色谱法 1 范围 本文件规定了采用高效液相色谱法测定工业大麻中大麻二酚、大麻二酚酸分析方法的原理、仪器与试 剂材料、分析步骤、仪器测定条件、结果计算与表示、数据精密度。 本文件适用于工业大麻中大麻二酚、大麻二酚酸含量的测定，定量测定范围为： 0.4 mg/g ~100 mg/g。 2 规范性引用 文件 下列文件 中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中注日期的引用文件，仅 该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其 最新版本（包括所有的修改单）适用于本文 件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 6379.2 测量方法与结果的准确度 （正确度与精密度） 第2部分：确定标准测量方法重复性与再现 性的基本方法 GB/T 26792 高效液相色谱仪 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 工业大麻 Industrial hemp 植株群体花期顶部 叶片及花穗干物质中的四氢大麻酚（ THC）质量分数 <0.3%，不能直接作为毒品利 用的一类大麻作物品种。 4 原理 工业大麻样品烘干、粉碎、研磨、过筛后，经 95% 乙醇溶液提取，微孔滤膜过滤，用反相色谱分离， 紫外检测器检测，采用外标法定量。 5 试剂和材料 除另外有规定外，所用试剂均为分析纯 ，水应符合 GB/T6682 中一级水的要求。 5.1 甲醇（ CH 3OH）：色谱纯。 5.2 乙腈（ C2H3N）：色谱纯。 5.3 乙醇（ C2H5OH）：色谱纯。 5.4 磷酸（ H3PO4）：纯度 ≥85%。 5.5 大麻二酚（ CBD）标准品（ C21H30O2）： CAS：13956-29-1，纯度 ≥ 98%。 5.6 大麻二酚酸（ CBDA）标准品（ C22H30O4）： CAS：1244 -58-2，纯度 ≥ 98%。 5.7 95%乙醇溶液：准确移取 950 mL无水乙醇（ 5.3）于 1 L容量瓶（ 6.9）中，以水定容至刻度线，混 匀。 5.8 流动相 A（0.1%磷酸水溶液）： 准确移取 1 mL磷酸（ 5.4）于 1 L容量瓶（ 6.9）中用水定容， 使用前 经水相滤膜（6.7）抽滤。 5.9 流动相 B（0.1%磷酸乙腈溶液）： 准确移取 1 mL磷酸（ 5.4）于 1 L容量瓶（ 6.9）用乙腈定容， 使用 前经有机相滤膜（6.8）抽滤，超 声（ 6.2）脱气。 全国团体标准信息平台 T/CAIA/SH016-2021 3 5.10 混合标准 储备溶液（40 μg/mL）：准确移取 1 mg/mL CBD标准品（ 5.5）、 1 mg/mL CBDA标准品 （5.6）各1 mL置于 25 mL容量瓶（ 6.9）中，用 甲醇（5.1）溶解并定容 ，标准储备溶液避光保存于 4 ℃ 冰箱备用，有效期 3个月。 6 仪器和设备 6.1 涡旋振荡器 ； 6.2 超声波清洗器 ，功率不低于 250 W，或相当的设备 ； 6.3 离心机，不低于 4000 rpm，或相当的设备 ； 6.4 鼓风干燥箱，能够控制温度在 (70℃±1℃) 范围； 6.5 高效液相色谱 ，配有自动进样器、四元泵、柱温箱、二极管阵列检测器等部分； 6.6 电子天平 ，感量 0.0001 g； 6.7 水相滤膜：孔径 0.22 μm； 6.8 有机微孔 滤膜：孔径 0.22 μm； 6.9 容量瓶： 1 L，100 mL，50 mL，25 mL，10 mL。 7 分析步骤 本章所述操作尽可能避免阳光直射或在强光下操作 。 7.1 样品提取 取适量阴干的工业大麻样品置于鼓风干燥箱（ 6.4） 70 ℃± 1 ℃ 干燥 4 h，全部研细混匀，过 270 μm 筛；称取 0.2 g（精确到 0.001 g） 样品于试管中，记录称量 质量 mi。 加入 95% 乙醇溶液（ 5.7）10 mL，用涡旋振荡器（ 6.1）涡旋 20 s，用超声波清洗器（ 6.2）超声 15 min 后，在离心机（ 6.3）上以 3500 r/min 离心 3 min，将清液转移至 100 mL容量瓶（6.9），重复上述步骤 3 次，合并上清液，并用 95% 乙醇溶液（ 5.7）定容至 100 mL。过 0.22 µm 有机微孔滤膜（ 6.8）后待测。 7.2 校准曲线的配制 分别准确移取 适量大麻酚混合 标准储备溶液（ 5.10）于10 ml容量瓶中 ，用甲醇（5.1）稀释并定容至刻 度线，摇匀，得到 大麻酚系列校准曲线 工作溶液（质 量浓度分别为 0.8 μg/mL，1.6 μg/mL，4μg/mL，50 μg/mL，100 μg/mL ，180 μg/mL，190 μg/mL，200 μg/mL ）。 7.3 样品测定 7.3.1 高效液相色谱参考条件 a) 色谱柱： C18，150 mm× 4.6 mm ，粒径 5 μm，或性能相当者； b) 流动相：V(0.1% 磷酸乙腈 )：V(0.1%磷酸水溶液 )=65:35等度洗脱 c) 进样体积： 10 μL； d) 柱温： 30 ℃； e) 流速： 1.0 mL/min ； f) 洗脱时间： 30 min； g) 检测波长 ：220 nm 7.3.2 高效液相色谱测定 分别取适量的 大麻酚系列校准曲线 工作溶液（ 7.2）及待上机 样品溶液，按照 6.2.1 列出的条件进行 高 效液相色谱分析测定。由保留时间对 各大麻酚物质 进行定性， 根据各大麻酚校准曲线工作溶液